PCR實驗方法步驟：
實驗過程： 一、試劑準備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5．Taq酶 二、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 三、注意事項 １．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。 ２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。 ３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 ４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。 ５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。 ６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。 ７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。 小鼠血管抑素(mouse Angiostatin) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠載脂蛋白E(mouse APO E) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠B細胞刺激因子(mouse BAFF) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠凋亡因子BAX(mouse BAX) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠細胞凋亡相關(guān)基因(mouse BCL-2) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子(mouse BDNF) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子受體(mouse BDNF R) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠骨成型蛋白-2(mouse BMP-2) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠骨成型蛋白-4(mouse BMP-4) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠骨成型蛋白受體1A(mouse BMP-R1A) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(mouse BMP-R2) ELISA 48T/96T 進口分裝 小鼠腦鈉肽(mouse BNP) ELISA 48T/96T 進口分裝